علي، يحيى حسن محمودسوادي، إخلاص محمد حسين2024-05-212024-05-211444https://hdl.handle.net/20.500.14154/72103campylobacter spp. is the causative agent of the human foodborne disease Campylobacteriosis, one of the most common forms of bacterial gastroenteritis worldwide. The digestive system of birds and other domestic and free-living animals is the natural reservoir of Campylobacter bacteria as a part of normal flora. Thus, Poultry meats have been considered the primary source of campylobacteriosis infections among various foods. In this study, eighty-six samples of chicken meat and organs (Meat: thighs = 21, breasts = 16, legs = 21, wings =17, and Organs: liver = 11) were collected from supermarkets and retail shops in Jazan City. Collected samples represented seven common commercial brands of poultry companies (A, B, C, D, E, F, & G) in Jazan City. Cultivation and isolation of Campylobacter spp. were carried out according to the protocols described by ISO 10272-1: 2017 using sterile Bolton Selective Enrichment Broth (containing 5% lysed blood and antibiotics supplement) and modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar (mCCDA) having CCDA antibiotics supplement. Ten grams of chicken meat sample were weighed into a sterile plastic bag, then 90 ml sterile Bolton Selective Enrichment Broth was added and homogenized using a Stomacher. Finally, the mixture was incubated at 37 °C for 4 hours, followed by 41.5°C for 44+ 4 hours under microaerophilic conditions (5% O2, 10% CO2, and 85% N2). After enrichment, 0.1 ml of the broth was streaked onto campylobacter selective agar (mCCDA). The plates were incubated at 41.5ºC for 48 hours under the same microaerophilic conditions. Out of the 86 samples, 61 (representing six companies) showed growth on mCCDA agar plates after incubation. In contrast, no bacterial growth was observed on mCCDA agar plates from samples representing one of the seven companies (Company B). Bacterial isolates (n = 122) were subjected to a Campylobacter multiplex Polymerase Chain Reaction (Multiplex-PCR) for the identification of the genus Campylobacter (816 bp) and identification of the three campylobacter species; C. jejuni (323 bp), C. Coli (126 bp), and C. lari Master thesis Eklas Sawadi (251 bp). PCR products for the Campylobacter species were obtained only from the positive controls but not the isolates; consequently, the isolates were identified as non-Campylobacter species. To confirm this result, 19 isolates were identified by amplifying and sequencing the 16S rRNA gene. Sequence analysis on the NCBI website showed that sixteen isolates (84%) were identified as E. coli and three isolates (16%) as Proteus mirabilis. Furthermore, six of the sequenced isolates were subjected to an antibiotic susceptibility test using 8 antibiotics: (Amoxycillin (AMX), Azithromycin (AZM), Chloramphenicol (C), Erythromycin (E), Tetracycline (TE), Nalidixic acid (NA), Norfloxacin (NX), and Streptomycin (S). Results showed that all isolates were multidrug resistant. Finally, 24 filtrate samples were tested against the 3 Campylobacter reference strains (C. jejuni ATCC 33291, C. coli ATCC 33559 & C. lari ATCC 35221) were used as sensitive hosts for the detection of lytic Campylobacter phages using spot-test. No lysis zones were observed from the three tested reference strains against all 24 filtrates, i.e., no lytic Campylobacter phages were detected in the filtrates. In the future, the rest of the bacterial isolates will be identified using polymerase chain reaction (PCR) for the 16S-rRNA gene and analyzing its DNA sequence, as well as antibiotic sensitivity testing for all bacterial isolates using a more significant number of antibiotics.يعتبر ميكروب الكامبيلوباكتر (العطيفة) هو العامل المسبب لمرض كامبيلوباكتيريوسيس الذي يصيب الإنسان وينتقل عن طريق الغذاء، وهذا المرض هو أحد أكثر أشكال التهاب المعدة والأمعاء البكتيري شيوعًا في جميع أنحاء العالم. يعتبر الجهاز الهضمي للطيور وغيرها من الحيوانات الأليفة هو المستودع الطبيعي لبكتيريا العطيفة كجزء من الميكروبات الطبيعية الموجودة في الجهاز الهضمي. وكذلك تعتبر لحوم الدواجن هي المصدر الرئيسي للعدوى بمرض كامبيلوباكتيريوسيس بين الأطعمة المختلفة. في هذه الدراسة ، تم جمع ستة وثمانين عينة من لحوم وأعضاء الدجاج (اللحوم: الأفخاذ = 21 ، الصدور = 16 ، الأرجل = 21 ، الأجنحة = 17 ، الأعضاء: الكبد = 11) من السوبر ماركت ومحلات البيع بالتجزئة في مدينة جازان. ومثلت العينات المجمعة سبع علامات تجارية شائعة لشركات الدواجن في مدينة جازان وتم الإشارة إليها الأحرف: A، B ، C ، D ، E ، F & G. تم فحص وفقًا للبروتوكول: (ISO 10272-1/2017) ، باستخدام مرق بولتون الانتقائي (Bolton Selective Enrichment Broth) الذي يحتوي على 5 ٪ من الدم المتحلل ومضادات ميكروبية (Cefoperazone, Vancomycin, Trimethoprim & Cycloheximide)، والأجار الانتقائي mCCDA (Modified Charcoal Cefoperazone Deoxycholate Agar) الذي يحتوي أيضا على مضادات ميكروبية (Amphotericin B & Cefoperazone) تسمح فقط بنمو ميكروب الكامبيلوباكتر. تمت عملية الفحص عن طريق وزن عشرة جرامات من كل عينة من عينات الدجاج في كيس بلاستيكي معقم ، ثم إضافة 90 مل من مرق بولتون الانتقائي المعقم وتم خلطها جيدا باستخدام جهاز الخلط (Stomacher). بعد ذلك تم تحضين الخليط عند حرارة 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات ، بعد ذلك تم التحضين عند درجة حرارة 41.5 درجة مئوية لمدة 44 ساعة تحت ظروف بيئية منخفضة الاكسيجين (5% O2, 10% CO2, and 85% N2). بعد التخضين، تم فرد 0.1 ملليتر من المرق على أجار mCCDA المعدل، وتم تحضين الأطباق عند 41.5 درجة مئوية لمدة 48 ساعة تحت نفس الظروف البيئية المناسبة لنمو ميكروب الكامبيلوباكتر. من بين 86 عينة (تمثل 7 شركات) ، أظهرت 61 نموًا على أطباق أجار mCCDA بعد التحضين. في المقابل، لم يلاحظ أي نمو جرثومي على لوحات أجار mCCDA من عينات تمثل إحدى الشركات السبع (الشركة B). بعد ذلك تم فحص جميع العزلات البكتيرية (العدد = 122) بطريقة تفاعل تسلسل البلمرة المتعدد لميكروب الكامبيلوباكتر (Campylobacter Multiplex-PCR) لتحديد جنس Campylobacter (816 bp) وتحديد أنواع العطيفة الثلاثة: C. jejuni (323 bp) ، C. Coli (126 bp) ، و C. lari (251 bp). أظهر تفاعل تسلسل البلمرة المتعدد لأنواع العطيفة نتائج إيجابية فقط من بكتيريا الكامبيلوباكتر المعرفة ولكن ليس من العزلات البكتيرية. وبالتالي ، تم تحديد العزلات على أنها ليست كامبيلوباكتر بكتيريا. لتأكيد هذه النتيجة ، تم إختيار 19 عزلة بكتيرية وعمل تفاعل تسلسل البلمرة (PCR) لجين الحمض الريبوزي الريبوسومي (16S-rRNA gene). أظهر تحليل تسلسل الحمض النووي على موقع NCBI أن ستة عشر عزلة (84٪) تم تعريفها على أنها E. coli وثلاث عزلات (16٪) على أنها Proteus mirabilis وهي غير حساسة للعديد من المضادات الحيوية وتتسب أمراض للإنسان وبخاصة عدوى الجهاز البولي. علاوة على ذلك ، تم إختيار ستة عزلات بكتيرية (من العزلات التي تم معرفة تتابع الحمض النووي لهم وتم تعريفهم) وعمل إختبار الحساسية للمضادات الحيوية لهم باستخدام 8 مضادات حيوية: (Amoxycillin (AMX) ، Azithromycin (AZM) ، Chloramphenicol (C) ، Erythromycin (E) ، Tetracycline (TE) ، Nalidixic acid (NA) ، النورفلوكساسين (NX) واستربتومايسين (S)، وأظهرت النتائج أن جميع العزلات كان لديها مقاومة متعددة للمضادات الحيوية، وهذا يفسر نموها على الأوساط البيئية المستخدمة لنمو وعزل ميكروب الكامبيلوباكتر والتي تحتوي على مضادات حيوية. وأخيراً تم اختبار 24 عينة ضد 3 سلالات معرفة من بكتيريا الكامبيلوباكتر (C. jejuni ATCC 33291, C. coli ATCC 33559 & C. lari ATCC 35221) كمضيفات حساسة لاكتشاف لاقمات العطيفة المحللة باستخدام اختبار البقعة. لم يتم ملاحظة أي مناطق تحلل من السلالات المعرفة الثلاثة المختبرة ضد جميع المرشحات الـ 24 ، أي أنه لم يتم اكتشاف عاثيات كامبيلوباكتر في العينات. مستقبلا سوف يتم تعريف باقي العزلات البكترية بإستخدام تفاعل تسلسل البلمرة (PCR) لجين الحمض الريبوزي الريبوسومي (16S-rRNA gene) وتحليل تتابع الحمض النووي له، وكذلك عمل إختبار الحساسية للمضادات الحيوية لجميع العزلات البكتيرية باستخدام عدد أكبر من المضادات الحيوية.122en-USأنواع الكامبيلوباكترThesis