Browsing by Author "Alkharafi, Jana"

Now showing 1 - 1 of 1

Restricted
Molecular cloning and expression in Escherichia coli of a serine protease inhibitor gene from Rhamnus Frangula L
(Qassim University, 2024-04-25) Alkharafi, Jana; Ben Abdelmalek, Imen
مثبطات البروتياز هي عبارة عن بروتينات موجودة في الإنسان ومعظم الكائنات الحية كالنباتات والحيوانات ووظيفتها تنظيم نشاط التحلل البروتيني، ومن أكثر المثبطات التي حظيت بالاهتمام لتطبيقاتها المتعددة في التكنولوجيا الحيوية والطب الحيوي هي مثبطات السيرين بروتياز والتي تعد من أبرز المثبطات في النبات. هدفت الدراسة إلى تضخيم واستنساخ جين مثبط سيرين البروتياز من نبات (Rhamnus frangula). تم تصميم البادئات بالاستناد على الأحماض الأمينية لمثبط كونيتز التربسين ۳ الموجود في فول الصويا (Glycine max) واستخدامها لتضخيم تسلسل جين الـ(RfIP1) من (DNAو RNA) المستخرجة من أوراق (Rhamnus frangula) باستخدام (PCR وPCRـRT)، اظهر الفصل الكهربائي اختلافًا في هجرة امبليكون من DNAوcDNA مما يكشف وجود متوالية داخلية مكونة من ٢١٠ نكليوتيدة. أظهرت نتيجة PCRـRT أن تسلسل cDNA يحتوي على إطار مفتوح يبلغ ٥٧٠ زوج قاعدي والذي يشفر ١٩١حمض أميني. بواسطة الـBLAST في قواعد بيانات NCBI كشف أن تسلسل cDNA يشترك بنسبة ٧٢.٦٩٪ مع مثبط كونيتز التربسين ۳ الموجود في فول الصويا (Glycine max) و١٢ .٦٩٪ مع مثبط كونيتز التربسين ۳(Glycine soya) مما يشير إلى أن هذا الأنواع قد تنتمي إلى نفس التركيب البروتيني والوظيفي. في الختام، نجحنا في تصنيع cDNA لمثبط سيرين البروتياز نوع كونيتز من نبات (Rhamnus frangula) واستنساخه جزيئًا في E. coli. تم أيضًا هندسة التراكيب الثانوية وثلاثية الأبعاد للمثبط باستخدام برنامج(I-Tasser). كما تم إجراء تحليل التطور الوراثي باستخدام برنامج التحليل الوراثي التطوري الجزيئي. بعد حصولنا على هذه النتائج يمكننا إضافة (RfIP1) إلى قائمة مثبطات البروتياز المستخلصة من النباتات والتي ستثرى لما لها من تطبيقات تكنولوجية حيوية وعلاجية مهمة.
24 0